作者：周道根， 張的鳳， 龔千峰， 陳泣
【關(guān)鍵詞】 馬錢子；,,炮制；,,士的寧；,,馬錢子堿；,,反相高效液相色譜
摘要：目的用反相高效液相色譜（RPHPLC）法對(duì)馬錢子生品及炮制品中士的寧和馬錢子堿含量進(jìn)行測(cè)定，探討醋制馬錢子炮制原理。方法Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm,5 μm)，流動(dòng)相為乙腈水二乙胺（34∶100∶1），檢測(cè)波長260 nm。結(jié)果江西改良炮制法炮制品中士的寧和馬錢子堿的含量較低。結(jié)論 該法精確、簡便、重現(xiàn)性好。
關(guān)鍵詞：馬錢子； 炮制； 士的寧； 馬錢子堿； 反相高效液相色譜
Abstract：ObjectiveTo develop an RPHPLC method for determination of strychnine and brucine in Semen Strychni and its processed products and study the principle of Semen Strychni processed products with Jiangxi innovated method .MethodsA Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm, 5 μm) column was used with acetonitrilewaterdiethylamine(34∶100∶1) as the mobile phase ,the content was detected at a wavelength of 260 nm.ResultsThe contents of strychnine and brucine in the processed products with Jinngxi innovated method were lower.ConclusionThis method is accurate,simple and reliable.
Key words：Processing; Strychnine; Brucine; RPHPLC
馬錢子為馬錢科植物馬錢 Strychnos nux-vomica L.的干燥成熟種子［1］,亦名番木鱉。苦,溫；有大毒，歸肝、脾經(jīng)。具有通絡(luò)止痛、散結(jié)消腫之功效。主要成分為生物堿，其中主要有效成分為士的寧（C21H22N2O2），但毒性較大，其次是馬錢子堿（C22H26N2O2），其毒性是士的寧的1/20，但療效卻只有士的寧的1/40。馬錢子未經(jīng)炮制不能入內(nèi)服藥，只能外用。馬錢子的炮制方法很多，全國常用炮制方法為砂燙法和油炸法，其中砂燙法為藥典法。江西炮制法有關(guān)的改良炮制法有醋酸浸法、醋酸浸砂炒法、醋酸煮砂炒法。另外江西的樟、建幫加工炮制的中藥飲片著色獨(dú)特，其薄如紙，藥效顯著，名揚(yáng)四海，素有“一粒馬錢子切206片”的說法。為了論證江西改良炮制法的合理性，我們對(duì)馬錢子的相關(guān)炮制品作了含量測(cè)定。用75%甲醇回流提取2 h，采用反相高效液相色譜法測(cè)定馬錢子生品及各炮制品中士的寧和馬錢子堿的含量。
1 材料
1.1 藥品馬錢子購自樟樹市藥材市場(chǎng)，經(jīng)本院中藥鑒定教研室鑒定為馬錢Strychnos nux-vomica L.的干燥成熟種子。
1.2 儀器與試藥Agilent 1100 series 高效液相色譜儀。對(duì)照品士的寧及馬錢子堿均購于藥品生物制品檢定所。乙腈為色譜純，其余為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 樣品炮制
2.1.1 馬錢子取生馬錢子粉碎成細(xì)粉。
2.1.2 砂燙法按《藥典》2005年版馬錢子項(xiàng)下方法炮制。
2.1.3 油炸法［2］取市售麻油，倒入鐵鍋中加熱至217℃，投入馬錢子3 min左右后炸到老黃色，取出瀝盡油，晾干即得。
2.1.4 樟幫尿泡法［3］原藥放入童小便中浸泡49 d至鼓脹，取出，再用清水漂浸21 d，取出，刮去絨毛。再用水漂浸7 d，撈出，瀝干水，用樟刀切成腰子片，曬干。
2.1.5 樟幫尿泡滑石粉炒法［3］取尿泡馬錢子片，用滑石粉炒至黃色，篩去滑石粉，研末即可。
2.1.6 建幫尿泡砂炒法取原藥材加入童小便浸泡，置49 d后取出，用清水?dāng)嚢铔_洗凈尿汁，再加清水漂浸5 d，取出，用碎瓷片刮去絨毛，切薄片，曬至全干。取定量的凈白砂，入鍋內(nèi)加熱至230℃倒入馬錢片，不斷翻炒，2 min左右后迅速出鍋，篩去砂子，攤涼，再碾細(xì)末。
2.1.7 醋酸浸法［4］取凈馬錢子用水泡2 d，潤12 h，切1.5 mm的薄片，再用5%的醋酸溶液浸泡5 d，水漂3 d，干燥，碾碎。
2.1.8 醋酸浸泡砂炒法取醋酸浸馬錢子片按砂燙法項(xiàng)下炮制。
2.1.9 醋酸煮法取將馬錢子用水泡2 d，潤12 h，洗凈，切制成1.5 mm的薄片，用5%的醋酸溶液緩火煮1.5 h，取出，晾干。
2.1.10 醋酸煮砂炒法取醋酸煮馬錢子片按《中國藥典》砂燙法項(xiàng)下炮制。
2.2 馬錢子士的寧與馬錢子堿含量測(cè)定
2.2.1 色譜條件Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm,5 μm)，以乙腈水二乙胺（34∶100∶1）為流動(dòng)相，流速為1 ml?min1，檢測(cè)波長260 nm，溫度30℃。
2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密稱取士的寧和馬錢子堿4.95 mg和3.09 mg至50 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度作為混合對(duì)照品溶液。分別吸取混合對(duì)照品0.1，0.2，0.5，1，2 ml至10 ml容量瓶中甲醇定容至刻度。分別精密吸取上述溶液20 ml注入高效液相色譜儀，以進(jìn)樣量的容度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。士的寧回歸曲線為Y=39 175.317 5X-3.571 05，r=0.999 93。
2.2.3 精密度實(shí)驗(yàn)分別精密吸取同一對(duì)照品溶液20 ml注入高效液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，RSD分別為：士的寧為0.92%，馬錢子堿為1.03%。
2.2.4 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)按樣品測(cè)定法對(duì)生品測(cè)定5次，結(jié)果士的寧平均含量為2.50%,RSD為1.36%；馬錢子堿平均含量為1.34%，RSD為1.56%。
2.2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一樣品試液，分別于0，2，4，8，12，24 h進(jìn)行測(cè)定，得士的寧和馬錢子堿的RSD分別為1.17%和1.89%。
2.2.6 回收率實(shí)驗(yàn)采取加樣回收法，取已知含量的生品5份，精密稱定，精密加入對(duì)照品適量，按樣品項(xiàng)下方法操作，計(jì)算回收率，結(jié)果士的寧的平均回收率為99.3%，RSD為2.01%；馬錢子堿平均回收率為98.1%，RSD為2.13%。
2.2.7 耐用性實(shí)驗(yàn)相同色譜條件下分別采用 Hypersil ODS2 C18(4.6 mm×200 nm,5 μm)和 Hypersil ODS2 C18(4.6 mm×250 nm,5 μm)進(jìn)行測(cè)定，峰形和分離度均較好；另外在一定范圍內(nèi)通過改變乙腈在流動(dòng)相中的比例，除保留時(shí)間有所變化外，也能獲得較好的分離度和峰形。
2.2.8 含量測(cè)定將生品和各炮制粉碎過3號(hào)篩，分別精密稱取生品和各炮制品3份，每份1 g于錐形瓶中，分別加氫氧化鈉試液5 ml浸潤5 min后，加75%甲醇30 ml，稱重，回流提取2 h，取出放涼，用甲醇補(bǔ)充減失的重量，精密吸取續(xù)濾液1 ml置25 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度作為供試品溶液。分別吸取供試品溶液20 ml注入高效液相色譜儀按上述條件進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見表1。
表1 馬錢子生品及炮制品士的寧與馬錢子堿的含量（略）
3 討論
本文采用的反相高效液相色譜法對(duì)馬錢子生品及各炮制品中士的寧和馬錢子堿進(jìn)行了含量測(cè)定，方法快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。通過反相高效液相色譜對(duì)馬錢子生品及炮制品中士的寧和馬錢子堿進(jìn)行了含量測(cè)定。結(jié)果顯示：各炮制品中士的寧和馬錢子堿的含量較生品均有不同程度的降低。其中以醋酸浸品和醋酸浸砂炒品中的含量為最低?！侗静菝审堋酚小坝么鬃⒏谓?jīng)且資住痛”，醋味酸、澀，人肝經(jīng)，具有收斂、散淤、止痛、解毒等功效。馬錢子生物堿與酸性成分結(jié)合，可形成可溶性的鹽從而降低毒性。同時(shí)，醋制馬錢子炮制工藝簡便可控，利于實(shí)現(xiàn)飲片規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)化，可為臨床提供安全穩(wěn)定的飲片。
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［1］ 國家藥典委員會(huì).藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)出版社，2005：34.
?。?］ 吳 皓，蔡寶昌，鄭培新，等.炮制對(duì)馬錢子中生物堿的影響［J］.中國中藥雜志，1994，19（5）：227.
?。?］ 龔千峰.樟樹中藥炮制全書［M］.南昌：江西技術(shù)出版社，1990：250.
?。?］ 蔡寶昌，何亞維.馬錢子不同炮制品中總生物堿的測(cè)定及急性毒性實(shí)驗(yàn)的比較，中國中藥雜志，1994，19（10）：598.
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