氣滯胃痛顆粒是《中國藥典》收載的非處方中成藥，處方來源于醫(yī)圣張仲景《傷寒論》中經(jīng)典方四逆散，由柴胡、白芍、枳殼、香附（炙）、延胡索（炙）、甘草（炙）6味藥材組成，具有舒肝理氣、和胃止痛的功效[1]。此藥臨床廣泛用于治療肝郁氣滯、胸痞脹滿、胃脘疼痛，療效確切，有抗炎鎮(zhèn)痛、抗?jié)?、促胃?dòng)力等作用[2-4]。本方即四逆散加延胡索、香附和血理氣，治療脅痛，寒熱往來，專以疏肝為目的。用柴胡、枳殼、香附理氣為主，白芍、延胡索和血為佐，再用甘草以緩之，調(diào)和諸藥?，F(xiàn)代藥理研究表明，柴胡具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛作用，且可以保護(hù)消化系統(tǒng)，提高機(jī)體免疫力；白芍可以抗炎鎮(zhèn)痛，治療包括便秘、腹瀉、腹脹、陰寒、脾虛等腸道應(yīng)激性綜合征，增強(qiáng)免疫功能；香附具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗氧化的作用，對胃黏膜具有保護(hù)作用；延胡索可以改善心血管疾病，具有抗實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍作用，抑制胃酸分泌，也具有抗炎鎮(zhèn)痛的藥理作用；枳殼具有調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)，治療胃腸道疾病的作用，同時(shí)還可以治療胃下垂和功能性消化不良；甘草也具免疫調(diào)節(jié)、抗炎鎮(zhèn)痛、解痙等功效[5-10]。復(fù)方氣滯胃痛顆粒具有明顯的胃黏膜保護(hù)及促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)作用，具有明顯的抗?jié)?、抗炎?zhèn)痛作用[2-4]。通過比較發(fā)現(xiàn)6味中藥既有相同的藥理作用，但是也各有側(cè)重，而中藥復(fù)方防治疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)是中藥相互協(xié)調(diào)，相互作用，從而達(dá)到整體作用。
近年來，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的快速發(fā)展及其在中醫(yī)藥研究中的拓展應(yīng)用，為系統(tǒng)研究中藥的藥效作用機(jī)制提供了快捷高效的新手段和新思路。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，基于系統(tǒng)生物學(xué)理論，從藥物、靶點(diǎn)與疾病間相互作用的整體性和系統(tǒng)性出發(fā)，通過采用復(fù)雜生物網(wǎng)絡(luò)模型，揭示藥物、基因、靶點(diǎn)、疾病之間復(fù)雜的整體生物網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，在此基礎(chǔ)上分析、預(yù)測藥物的藥理學(xué)機(jī)制[11-14]。而中藥及中藥復(fù)方具有多成分、多途徑、多靶點(diǎn)、協(xié)同作用的特點(diǎn)[15]，均關(guān)注的是整體性而非局部性，都注重的是致病因素或者藥物干預(yù)下機(jī)體或網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)表現(xiàn)出的整體反應(yīng)，而不單純是觀察某些局部的器官或病灶[16]?？梢哉f，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和中醫(yī)藥之間在整體性和系統(tǒng)性方面具有高度的一致性。這也為中藥復(fù)方的深入研究提供了新的機(jī)遇，運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)與系統(tǒng)的思想來理解復(fù)方和生物系統(tǒng)的復(fù)雜性，使得現(xiàn)代復(fù)方研究由描述轉(zhuǎn)為預(yù)測成為可能[17]。
本研究主要是基于文獻(xiàn)檢索和數(shù)據(jù)庫查詢方式收集氣滯胃痛顆粒中各藥味所含的化學(xué)成分和作用靶標(biāo)，并借助LC-MS技術(shù)對化學(xué)成分進(jìn)行指認(rèn)，利用蛋白質(zhì)相互作用信息建立藥物靶標(biāo)與炎癥疼痛靶標(biāo)的關(guān)聯(lián)，構(gòu)建“藥物-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，對氣滯胃痛顆粒抗炎鎮(zhèn)痛作用的主要靶點(diǎn)和作用通路進(jìn)行分析，并進(jìn)一步分析復(fù)方方解和現(xiàn)代藥理學(xué)研究及臨床運(yùn)用的關(guān)聯(lián)，以期對指導(dǎo)氣滯胃痛顆粒實(shí)驗(yàn)研究、臨床合理用藥以及為中藥方劑的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)進(jìn)一步研究提供參考。
1 材料與方法
1.1 儀器與試劑
安捷倫6550 iFunnel Q-TOF LC-MS（美國安捷倫科技公司）；Agilent 1290 超高效液相色譜儀；SynergyH2全功能微孔板檢測儀（美國BioTek公司）；萬分之一電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；臺(tái)式高速離心機(jī)（美國Thermo公司）；微量移液器、多道移液器（德國Eppendorf公司）；DK-600S三用恒溫水箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；Vortex-Genie? 2渦旋儀（深圳市安必勝科技有限公司）；離心管（美國康寧公司）；XS-205（COX-2）抑制劑篩選試劑盒（批號180227）購于上海碧云天有限公司；氣滯胃痛顆粒（批號20180809）由華潤三九醫(yī)藥股份有限公司提供；芍藥苷（批號110736-201842，質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.4%，由中國食品藥品檢定研究院提供）；鹽酸小檗堿（批號141128，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）、槲皮素（批號150914，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）、黃芩素（批號150320，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）、黃芩苷（批號151119，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）由成都普菲德生物科技有限公司提供。
1.2 樣品制備和LC/MS條件
取氣滯胃痛顆粒適量，研細(xì)，取樣2.0 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品。
生物流體的代謝分析在Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS上進(jìn)行。樣品序列是隨機(jī)的，每個(gè)樣品的4 μL等分試樣注射到ZORBOXRRHD C18分析柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm，Agilent Technologies公司）上，柱溫保持在30 ℃。對于ESI+分析，用25 min線性梯度實(shí)現(xiàn)分離，其中流動(dòng)相為溶劑A（含0.1%甲酸的水）和溶劑B（含0.1%
對于質(zhì)譜，使用具有正、負(fù)離子模式的電噴霧電離源（ESI）的Agilent 6550Q-TOF/MS。電噴霧源參數(shù)：電噴霧毛細(xì)管電壓在負(fù)電離模式下為3.5 kV，在正電離模式下為4 kV。質(zhì)量范圍設(shè)定為m/z80～1 000。負(fù)電離模式下氣體溫度為225 ℃，正電離模式下氣體溫度為225 ℃。氣體體積流量為13 L/min。霧化器壓力為137.90 kPa（負(fù)離子和正離。
1.3 數(shù)據(jù)庫及軟件
中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析數(shù)據(jù)庫TCMSP[18]（http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php），TCM-Datebase@ Taiwan數(shù)據(jù)庫（http://tcm.cmu.edu.tw），PubChen Compound數(shù)據(jù)庫（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ pccompound），人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫OMIM（http://www.omim.org/），蛋白質(zhì)相互作用信息數(shù)據(jù)庫DIP[19]（http://dip.doe-mbi.ucla.edu/dip/Main.cgi），蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫UniProt（http://www.uniprot.org/），DisGeNET數(shù)據(jù)庫（http://www.disgenet.org/ web/disGeNET/menu），網(wǎng)絡(luò)可視化及分析軟件Cytoscape（Version 3.5.1）。
1.4 靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集的建立
通過中藥系統(tǒng)生物學(xué)分析數(shù)據(jù)庫TCMSP，并結(jié)合文獻(xiàn)獲得氣滯胃痛顆粒中6味中藥所含化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及其作用靶點(diǎn)信息，并進(jìn)一步根據(jù)口服生物利用度（OB）和類藥性（DL）篩選活性成分，OB和DL是中藥成分ADME的關(guān)鍵參數(shù)。因此利用TCMSP數(shù)據(jù)平臺(tái)，計(jì)算ADME/T值，對OB、DL進(jìn)行評估，選取數(shù)據(jù)庫中同時(shí)滿足OB≥30%和DL≥0.18的化學(xué)成分以及文獻(xiàn)報(bào)道的有活性的化合物作為候選活性成分，建立氣滯胃痛顆粒的藥物成分靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集，并對數(shù)據(jù)集的化學(xué)成分進(jìn)行進(jìn)一步分析，借助LC-MS技術(shù)開展氣滯胃痛顆粒的全化學(xué)成分細(xì)致分析進(jìn)而用這些成分開展作用靶點(diǎn)的預(yù)測；通過人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫（OMIM）中輸入關(guān)鍵詞inflammation、inflammatory和pain，搜索已報(bào)道的和炎癥疼痛相關(guān)的基因，去除重復(fù)基因和假陽性基因，篩選和炎癥疼痛相關(guān)的基因和蛋白靶點(diǎn)，建立炎癥疼痛靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集；蛋白質(zhì)的相互作用信息來源于蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)庫（DIP，http://dip.doe-mbi.ucla.edu）。為了便于統(tǒng)一分析，以上所有靶點(diǎn)均轉(zhuǎn)化成UniProt ID格式。
1.5 網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析
以蛋白質(zhì)相互作用信息為紐帶，將氣滯胃痛顆粒的活性成分、成分對應(yīng)的靶點(diǎn)、炎癥疼痛對應(yīng)的靶點(diǎn)和交互蛋白對應(yīng)的靶點(diǎn)進(jìn)行關(guān)聯(lián)。將上述預(yù)測的結(jié)果輸入Excel表格并導(dǎo)入Cytoscape（3.5.1）軟件，采用Cytoscape軟件的Merge功能將活性成分與潛在靶點(diǎn)構(gòu)建“藥物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)。網(wǎng)絡(luò)中，節(jié)點(diǎn)（node）分別代表氣滯胃痛顆粒的單味藥、活性成分、作用靶點(diǎn)、交互蛋白。若某活性成分屬于某單味時(shí)，則將單味藥與活性成分以邊（edge）相連；若某一靶點(diǎn)為某單味藥或活性成分的潛在靶點(diǎn)時(shí)，則以邊相連，以此來體現(xiàn)氣滯胃痛顆粒多成分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)。利用軟件將以上網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化分析，并通過Network Analyzer工具對網(wǎng)絡(luò)中疾病靶標(biāo)進(jìn)行拓?fù)鋮?shù)分析，并針對炎癥疼痛靶標(biāo)中度值（degree）大于中位數(shù)2倍的靶標(biāo)篩選氣滯胃痛顆粒的主要抗炎鎮(zhèn)痛靶標(biāo)，其中選擇中介中心性（betweennesscentrality，BC）和接近中心性（closeness centrality，CC）均大于中位數(shù)的節(jié)點(diǎn)蛋白作為氣滯胃痛顆粒治療炎癥疼痛的關(guān)鍵靶點(diǎn)。針對上述構(gòu)建的“藥物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行簡化，提取氣滯胃痛顆粒中6味中藥藥物與其抗炎鎮(zhèn)痛的42個(gè)主要作用靶點(diǎn)和20個(gè)直接作用靶點(diǎn)分別構(gòu)建相互作用關(guān)系的網(wǎng)絡(luò)圖。
1.6 生物過程和通路分析
將氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛的直接作用靶標(biāo)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫，SelectIdentifier設(shè)置為OfficialGene Symbol，List Type設(shè)置為Gene List，限定物種為人，對氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛的直接作用靶標(biāo)進(jìn)行GO富集分析和KEGG通路富集。其中GO富集包括生物過程（biological process），分子功能（molecular function）和細(xì)胞組分（cellular component）3個(gè)部分，設(shè)定閾值P＜0.01且FDR＜0.01，并按照涉及的靶點(diǎn)數(shù)目簡單排序，篩選排名靠前的生物過程或通路。
1.7 作用靶點(diǎn)類型歸屬
DisGeNET數(shù)據(jù)庫是包含與人類疾病相關(guān)的基因和變體的平臺(tái)之一。在基因和疾病關(guān)系中，該數(shù)據(jù)庫一方面可以輸入疾病獲取與該疾病相關(guān)的基因信息，另一方面還可以輸入基因獲取與該基因相關(guān)的疾病信息。在DisGeNET數(shù)據(jù)庫選用基因進(jìn)行檢索，將上述氣滯胃痛顆粒的主要作用靶標(biāo)的UniProt ID依次導(dǎo)入數(shù)據(jù)庫中，獲取靶點(diǎn)類型信息（protein class）。
1.8 體外活性驗(yàn)證
精密稱取氣滯胃痛顆粒和槲皮素、小檗堿、芍藥苷單體適量，加DMSO溶解配成1 mg/mL的母液，超聲處理30 min，12 000 r/min離心10 min，取上清液過膜備用，使用時(shí)將一定量母液加入DMSO制成所需濃度溶液，即得供試品。
采用COX-2抑制劑篩選試劑盒對氣滯胃痛顆粒的治療胃炎作用進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，設(shè)置對照孔（底物、探針和緩存液）、100%酶活性對照孔（酶、底物、探針和緩存液）和受試樣品孔（酶、底物、探針、緩存液和樣品），每組不少于3個(gè)復(fù)孔，受試樣品孔分別加入氣滯胃痛顆粒樣品或單體化合物，混勻于37 ℃孵育10 min后，使用酶標(biāo)儀進(jìn)行熒光檢測，激發(fā)波長560 nm，發(fā)射波長590 nm。計(jì)算樣品孔和對照孔的平均相對熒光值（relativefluorescence unit，RFU），并計(jì)算每個(gè)樣品的抑制率。
抑制率＝(RFU100%酶活性對照－RFU樣品)/(RFU100%酶活性對照－RFU對照)
2 結(jié)果與分析
2.1 氣滯胃痛顆粒成分分析及抗炎鎮(zhèn)痛的成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
通過LC/MS得到氣滯胃痛顆粒的總離子流圖見圖1，通過保留時(shí)間、質(zhì)譜裂解規(guī)律、文獻(xiàn)信息共鑒定了147個(gè)化合物，結(jié)果見表1。根據(jù)氣滯胃痛顆粒所含化學(xué)成分與其作用靶標(biāo)的對應(yīng)關(guān)系以及DIP數(shù)據(jù)庫中的蛋白質(zhì)相互作用信息，將搜集到化合物成分、藥物作用靶標(biāo)和疾病靶標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)，構(gòu)建氣滯胃痛顆粒抗炎鎮(zhèn)痛的成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)?；谏鲜鼍W(wǎng)絡(luò)構(gòu)建方法，共篩選出氣滯胃痛顆粒中的化學(xué)成分147個(gè)，其中柴胡14個(gè)、延胡索（炙）42個(gè)、枳殼6個(gè)、香附（炙）17個(gè)、白芍9個(gè)、炙甘草75個(gè)，其中超過2個(gè)藥材共有的成分6個(gè)。成分作用的靶點(diǎn)蛋白330個(gè)以及炎癥疼痛相關(guān)疾病靶點(diǎn)184個(gè)，并依托相互作用蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫構(gòu)建生物靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)，利用Cytoscape 3.5.1軟件將以上網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化分析，結(jié)果見圖2。其中，紅色三角形代表氣滯胃痛顆粒中的化學(xué)成分；藍(lán)色圓點(diǎn)代表氣滯胃痛顆粒成分作用靶標(biāo)；黃色圓點(diǎn)代表氣滯胃痛顆粒間接作用的炎癥疼痛靶點(diǎn)；黃色正方形代表氣滯胃痛顆粒直接作用的炎癥疼痛靶點(diǎn)；紫色圓點(diǎn)代表與靶點(diǎn)蛋白存在相互作用的蛋白；棕色六邊形代表單味中藥。從圖2中可以看出同一靶點(diǎn)可對應(yīng)于不同的活性成分，也可以對應(yīng)相同的活性成分，充分體現(xiàn)了復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)。
2.2 氣滯胃痛顆粒治療炎癥疼痛的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)分析及靶標(biāo)篩選
利用Cytoscape 3.5.1軟件將以上網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化分析，并通過Network Analyzer工具對網(wǎng)絡(luò)中疾病靶標(biāo)的degree、BC和CC 3個(gè)拓?fù)鋮?shù)進(jìn)行評估和篩選，篩選結(jié)果作為氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛的主要作用靶點(diǎn)。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果，篩選參數(shù)確定為CC≥0.222 1，degree≥3，BC≥0.001 5，最終篩選出滿足條件的靶點(diǎn)44個(gè)，見表2。其中，藥物的直接作用靶點(diǎn)20個(gè)（directed＝1），藥物間接作用靶點(diǎn)24個(gè)（directed＝0）。
2.3 氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛的藥物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
針對上述構(gòu)建的“藥物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行簡化，提取氣滯胃痛顆粒中6味中藥藥物與其抗炎鎮(zhèn)痛20個(gè)直接作用靶點(diǎn)分別構(gòu)建相互作用關(guān)系的網(wǎng)絡(luò)圖，結(jié)果見圖3，這20個(gè)炎癥疼痛相關(guān)靶點(diǎn)在每味中藥中分布如下：柴胡中炎癥作用相關(guān)靶點(diǎn)17個(gè)；香附中炎癥作用相關(guān)靶點(diǎn)18個(gè)；白芍中炎癥作用相關(guān)靶點(diǎn)13個(gè)；延胡索中炎癥作用相關(guān)靶點(diǎn)19個(gè)；枳殼中炎癥作用相關(guān)靶點(diǎn)10個(gè)；甘草中炎癥作用相關(guān)靶點(diǎn)19個(gè)。氣滯胃痛顆粒中6味藥材均可作用于P35354（COX-2），P37231（PPARG），P23219（COX-1），Q16539（MAPK14），P00734（F2），P04150（KDR），P05412（JUN），P07477（PRSS1）等8個(gè)炎癥疼痛靶點(diǎn)。
2.4 氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛直接作用靶標(biāo)的GO富集分析
采用DAVID軟件對氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛的直接作用靶標(biāo)進(jìn)行GO富集分析，包括生物過程（biologicalprocess）、分子功能（MolecularFunction）和細(xì)胞組分（cellularcomponent）3個(gè)部分，其中，篩選P＜0.01、FDR＜0.01的結(jié)果見表3。結(jié)果表明，從生物過程的富集結(jié)果來講，氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛的靶標(biāo)主要參與RNA聚合酶II啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞對脂多糖的響應(yīng)、ERK1和ERK2級聯(lián)反應(yīng)、NO生物合成、炎癥疼痛反應(yīng)、凋亡、平滑肌增殖、DNA轉(zhuǎn)錄、血管增生、氧化應(yīng)激等過程的調(diào)節(jié)；從分子功能富集結(jié)果來說，氣滯胃痛顆粒抗炎鎮(zhèn)痛作用主要體現(xiàn)為與酶、相同蛋白、轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)DNA結(jié)合和受體信號蛋白酶活性激活等方面；從細(xì)胞組分的富集結(jié)果來說，氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛的靶標(biāo)主要集中于膜筏。
2.5 氣滯胃痛顆粒抗炎鎮(zhèn)痛直接作用靶標(biāo)的通路富集分析
采用DAVID軟件對氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛的直接作用靶標(biāo)進(jìn)行通路富集分析，選擇KEGG數(shù)據(jù)庫作為分類依據(jù)，篩選P＜0.01、FDR＜0.01的結(jié)果見表4。從表中可以看出氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛的主要作用過程包括對TNF信號通路、NOD樣受體信號通路、VEGF信號通路等與炎癥疼痛密切相關(guān)的信號通路。
2.6 作用靶點(diǎn)類型歸屬
將氣滯胃痛顆粒的44個(gè)作用靶點(diǎn)依次導(dǎo)入DisGeNET數(shù)據(jù)庫，獲取靶點(diǎn)對應(yīng)的蛋白質(zhì)類型，見表5。結(jié)果表明氣滯胃痛顆粒升高白細(xì)胞過程中有信號分子、酶調(diào)節(jié)劑、轉(zhuǎn)錄因子、受體、蛋白（連接蛋白、防御/免疫蛋白、貯藏蛋白、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、載體蛋白等）、酶（氧化還原酶、丙酮酸激酶、水解酶、異構(gòu)酶等）等物質(zhì)的參與。
2.7 體外驗(yàn)證試驗(yàn)
抑制效果。并選取單體化合物槲皮素、小檗堿和芍藥苷為例研究單體對COX-2的抑制效果。結(jié)果如圖4所示，該結(jié)果顯示，氣滯胃痛顆粒和3個(gè)單體化合物對COX-2酶活力都具有顯著的抑制作用，且在不同濃度范圍之內(nèi)具有明顯劑量依賴關(guān)系，但半數(shù)抑制濃度（IC50）不同，氣滯胃痛顆粒IC50為7 μg/mL，槲皮素IC50為1 μg/mL，小檗堿IC50為6 μg/mL，芍藥苷IC50為50 μg/mL。
3 討論
氣滯胃痛顆粒臨床廣泛用于治療中醫(yī)學(xué)和西醫(yī)學(xué)胃痛。胃病是我國常見的胃腸道疾病，由于社會(huì)競爭及飲食結(jié)構(gòu)的變化和影響，當(dāng)今社會(huì)胃病在人群中發(fā)病率高達(dá)80%。胃痛又稱之為胃脘痛，是以胃脘部或近心窩處出現(xiàn)疼痛為主癥的病證。由于肝郁氣滯引起的胸痞脹滿、胃脘疼痛屬于中醫(yī)學(xué)胃痛范疇；急性胃炎、慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、功能性消化不良、胃黏膜脫垂等病以上腹部疼痛為主要癥狀者，屬于西醫(yī)學(xué)胃痛范疇。對于慢性胃炎和胃神經(jīng)官能癥方面西醫(yī)沒有特別行之有效的方法，而中醫(yī)在治療胃痛方面具有臨床癥狀改善明顯，療效肯定的優(yōu)勢。炎癥疼痛[20]是具有血管系統(tǒng)的活體組織對損傷因子所發(fā)生的復(fù)雜防御反應(yīng)，機(jī)體許多成分參與炎癥疼痛反應(yīng)過程，主要包括白細(xì)胞、血漿蛋白、血管壁細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)和炎癥疼痛介質(zhì)等。氣滯胃痛顆粒臨床上主要用于治療慢性胃炎和胃潰瘍的病理性炎性疼痛，說明其既能抑制外周神經(jīng)末梢傳導(dǎo)而減輕疼痛，又能抑制繼發(fā)的炎性反應(yīng)所導(dǎo)致的炎性疼痛，臨床應(yīng)用非常廣泛。
氣滯胃痛顆粒以疏肝為正法，通過君臣佐使配伍關(guān)系達(dá)到療效。本方在四逆散的基礎(chǔ)上加延胡索、香附和血理氣，治療脅痛，寒熱往來，專以疏肝為目的。用柴胡、枳殼、香附理氣為主，白芍、延胡索和血為佐，再用甘草以緩之，系疏肝的正法。方中柴胡入肝膽經(jīng)，升發(fā)陽氣，疏肝解郁，透邪外出，為君藥。白芍?jǐn)筷?，養(yǎng)血柔肝，為臣藥，與柴胡合用，以補(bǔ)養(yǎng)肝血，條達(dá)肝氣，可使柴胡升散而無耗傷陰血之弊。香附，疏肝解郁，行氣止痛，與柴胡配伍，增強(qiáng)其理氣之效。佐以枳殼理氣解郁，泄熱破結(jié)，與柴胡為伍，一升一降，增舒暢氣之功，并奏升清降濁之效；與白芍相配，又能理氣和血，使氣血調(diào)和。延胡索活血行氣止痛，與香附配伍，增加其行氣止痛功效。甘草調(diào)和諸藥，益脾和中；與白芍配伍，則酸甘化陰，緩急止痛，為佐使藥。四藥配伍，共奏透邪解郁、疏肝理脾之效，調(diào)和肝脾。
利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法從整體上構(gòu)建氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛的藥物-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，結(jié)合中藥配伍理論分析的結(jié)果，可以發(fā)現(xiàn)氣滯胃痛顆粒的抗炎鎮(zhèn)痛作用機(jī)制并非單一針對某條通路或某個(gè)作用靶點(diǎn)進(jìn)行調(diào)控，而是可能通過多靶點(diǎn)復(fù)雜通路的共同干預(yù)起效，體現(xiàn)了諸藥配伍，協(xié)同增效的理論。氣滯胃痛顆粒147個(gè)化學(xué)成分，交互作用于疼痛相關(guān)的靶點(diǎn)184個(gè)、直接靶點(diǎn)20個(gè)，作用機(jī)制主要與TNF信號通路、NOD樣受體信號通路、VEGF信號通路等16個(gè)通路有關(guān)。根據(jù)作用的靶點(diǎn)進(jìn)一步分析氣滯胃痛顆粒全方藥物組成，發(fā)現(xiàn)方中iNOS、PPARG、F2、PRSS1、MAPK14、PTGS1、JUN、KDR，COX-1、PPARG等靶點(diǎn)與促進(jìn)血小板的活化和聚集，血管收縮和平滑肌細(xì)胞的增殖有關(guān)，體現(xiàn)在柴胡、香附和枳殼解痙止痛的作用，也與白芍和延胡索的活血作用相呼應(yīng)。MAPK14、F2等靶點(diǎn)在機(jī)體免疫過程中發(fā)揮保護(hù)作用，體現(xiàn)在白芍和甘草增強(qiáng)免疫調(diào)和諸藥的作用。因此，通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析，可以進(jìn)一步分析氣滯胃痛顆粒的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)內(nèi)涵，并能夠進(jìn)一步解析中醫(yī)配伍理論的精髓。
環(huán)加氧酶（COX）是花生四烯酸代謝途徑的重要作用酶，其可以催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素類物質(zhì)。目前發(fā)現(xiàn)COX有2種COX-1和COX-2同工酶。COX-2是一種膜結(jié)合蛋白[21]。研究證實(shí)，COX-2一般在正常組織較少表達(dá)，它主要在單核細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、滑膜成纖維細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等一些與炎癥有密切關(guān)系的細(xì)胞或組織上表達(dá)[22]。生理狀態(tài)下絕大部分組織細(xì)胞不表達(dá)COX-2；而在一些疾病狀態(tài)下，如炎癥、腫瘤等受外來病原體刺激、破壞誘導(dǎo)后，COX-2參與和加重炎癥反應(yīng)，且其表達(dá)水平與炎癥的嚴(yán)重程度相關(guān)，參與多種病理生理過程[23-24]。臨床及實(shí)驗(yàn)研究已證明COX-2及相關(guān)信號通路在胃部疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色[25]。而且胃黏膜COX-2的表達(dá)水平影響胃炎和胃癌變化[26]。因此，COX-2可能是氣滯胃痛顆粒治療炎癥/疼痛的重要靶標(biāo)之一。
本研究針對上述分析中部分單體成分以及成藥對COX-2的抑制活性開展了進(jìn)一步分析，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道槲皮素、小檗堿、芍藥苷3種化合物對COX-2的表達(dá)均有顯著影響[27-29]，而單體化合物的體外試驗(yàn)亦證實(shí)3種單體確實(shí)對COX-2有抑制作用，且具有較為明顯的劑量依賴關(guān)系，且從IC50來看，上述單體成分及成藥抑制COX-2效果表現(xiàn)為槲皮素＞小檗堿＞氣滯胃痛顆粒＞芍藥苷，其中，《中國藥典》檢測成分芍藥苷活性顯著低于其他2個(gè)成分及全方，提示目前藥典檢測的指標(biāo)性成分對于表征成藥的整體生物活性代表性不足，建議應(yīng)適當(dāng)增加其他高活性成分作為檢測指標(biāo)，或采用指紋圖譜、化學(xué)特征圖譜的方式進(jìn)行整體控制。
本研究本研究從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)角度說明氣滯胃痛顆粒前期相關(guān)研究的結(jié)果具有可靠性，但由于單純從數(shù)據(jù)角度分析，也存在一定的不足，對于氣滯胃痛顆粒的抗炎鎮(zhèn)痛作用機(jī)制還需后期實(shí)驗(yàn)研究的進(jìn)一步驗(yàn)證，從而更加系統(tǒng)科學(xué)地闡述氣滯胃痛顆粒的抗炎鎮(zhèn)痛作用機(jī)制。
參考文獻(xiàn)（略）
來 源：楊曉娟，胡黃婉茵，張海珠，郝俊杰，劉 靖，劉曉熠，王 玄，鄔國松，肖小河，牛 明，羅光明. 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的氣滯胃痛顆?？寡祖?zhèn)痛活性作用分析 [J]. 中草藥, 2019, 50(13):3094-3106.
