作者及來源
高海燕, 朱玉蘭, 孫立.
國際腫瘤學(xué)雜志,2016,43( 5 ): 326-329.
摘 要
目的 比較TA方案(多西他賽＋表柔比星)和TA方案聯(lián)合樹突細(xì)胞(DC)-細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)的免疫治療方案在轉(zhuǎn)移性乳腺癌(MBC)中的療效和不良反應(yīng)。
方法 分析2011年1月至2013年1月在我院接受治療的43例MBC患者的臨床資料。根據(jù)治療方案的不同將患者分為單純治療組(TA方案，對照組，22例)和聯(lián)合治療組(TA方案＋DC-CIK細(xì)胞免疫治療，觀察組，21例)。比較兩組患者的治療療效、臨床癥狀改善狀況、不良反應(yīng)以及治療前后患者外周血T細(xì)胞免疫表型改變。
結(jié)果 觀察組患者的治療總有效率(85.7%)高于對照組(63.6%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2＝4.949，P＝0.026)。不良反應(yīng)中白細(xì)胞下降發(fā)生率最高，觀察組為76.2%，對照組為59.1%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2＝0.858，P＝0.36)。治療后觀察組患者疲倦乏力、食欲不振和失眠盜汗的發(fā)生率均低于對照組(23.8%∶54.5%，χ2＝4.246，P＝0.04；19.0%∶54.5%，χ2＝5.795，P＝0.02；19.0%∶50.0%，χ2＝4.532，P＝0.03)。治療后觀察組患者的CD3＋T細(xì)胞(60.4±12.3∶47.4±12.8，t＝3.393，P<0.01)、cd3＋><0.01)、cd4＋><><0.01)、nk><>
結(jié)論 相對于單純TA方案，TA化療方案聯(lián)合DC-CIK細(xì)胞免疫治療在MBC中療效更佳，可以顯著改善患者的免疫功能，并未增加不良反應(yīng)。
正 文
目前乳腺癌患者術(shù)后5年內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的情況仍然很多。以化療為主的綜合治療是治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌(metastatic breast cancer，MBC)的主要方式，多西他賽＋表柔比星(TA方案)已經(jīng)成為治療乳腺癌的重要化療方案。而作為過繼性生物治療法，樹突細(xì)胞(DC)-細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)免疫治療法是采集患者外周血中來源于單個核細(xì)胞的CIK細(xì)胞和DC細(xì)胞，以及經(jīng)一段時間增殖和體外活化的細(xì)胞，以回輸?shù)姆绞皆俅芜M(jìn)入患者體內(nèi)，其特異性殺傷腫瘤細(xì)胞的活性更強。本研究旨在通過比較TA化療方案以及化療聯(lián)合DC-CIK細(xì)胞免疫治療方案，分析兩種方案對MBC患者的不良反應(yīng)和療效。
——1.1——
研究對象
分析2011年1月至2013年1月在我院接受治療的43例MBC患者的臨床資料。入選標(biāo)準(zhǔn)：年齡30～70歲，平均(44.0±9.8)歲；預(yù)計生存期超過3個月；Karnofsky功能狀態(tài)(KPS)評分至少為60分；經(jīng)細(xì)胞學(xué)和(或)組織學(xué)證實的MBC；近期未接受抗腫瘤治療；轉(zhuǎn)移部位均得到了MRI、CT、骨掃描以及超聲確診；血常規(guī)、肝腎功能正常者。排除標(biāo)準(zhǔn)：有心理或精神疾病無法配合治療和療效評估的患者；并發(fā)其他惡性腫瘤的患者；肝、心、腎功能不全患者；顱內(nèi)轉(zhuǎn)移者。根據(jù)治療方案的不同將患者分為單純治療組(對照組，22例)和聯(lián)合治療組(觀察組，21例)。
——1.2——
研究方法
采用美國Gibco公司生產(chǎn)的Ficoll-Hypaque提取患者外周血中單個核細(xì)胞離心、洗滌，采用Austria PAA laboratories GmbH生產(chǎn)的RPMI1640(無血清)進(jìn)行重懸，在5%CO2、37 ℃的培養(yǎng)箱內(nèi)放置孵育，將懸浮細(xì)胞收集至另一個離心管中，洗板后將含10%的胎牛血清(FBS)RPMI1640培養(yǎng)液加入其中，繼續(xù)培養(yǎng)；第3天補加DC培養(yǎng)液；第5天將腫瘤特異性抗原(20～80 μg/ml)加入其中，誘導(dǎo)后在12～16 h時將500 U/ml的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)加入其中；第8天收集細(xì)胞、離心、反復(fù)洗滌、重懸，以靜脈回輸?shù)姆绞捷斔徒o患者，總共4次。
將單個核細(xì)胞重懸于RPMI 1640培養(yǎng)液(含10%FBS)中，補給γ干擾素(INF-γ)后于5%CO2、37 ℃的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育；第2天補給IL-2溶液和0.5 μg/ml CD3單抗溶液；第3天補給RPMI1640培養(yǎng)液(含10%FBS)；第11～12天收集CIK細(xì)胞，離心、洗滌、重懸后以靜脈回輸?shù)姆绞捷斔徒o患者，總共4次。
細(xì)胞回輸?shù)那?天用細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)液涂板，回輸?shù)那? h，運用凝膠法施行細(xì)菌內(nèi)的毒素檢查。在第7、12天分別收集CIK及DC細(xì)胞給予細(xì)胞免疫活性的分析，DC細(xì)胞分別用CD86、CD80、CD1a、CD3以及人白細(xì)胞抗原(HLA-DR)標(biāo)記，CIK細(xì)胞用CD3/CD56標(biāo)記，于避光4 ℃的條件下標(biāo)記30 min，反復(fù)洗滌后重懸，上Calibor BD機檢測。
在采集單個核細(xì)胞的當(dāng)天和治療完成后的第7天用CD56、CD8、CD4、CD3分別施行熒光標(biāo)記來檢測患者外周血內(nèi)的T細(xì)胞亞群。
詳細(xì)了解患者的病史，行體格檢查和KPS評分。入選患者均接受TA化療方案，表柔比星50 mg/m2，多西他賽75 mg/m2，3周一個療程。對照組患者接受單用化療的治療方式；觀察組：每次療程前2天提取患者的單個核細(xì)胞，完成后的第3天開始回輸DC-CIK細(xì)胞(用100 ml 0.9%的生理鹽水將1×107 DC及1×107 CIK細(xì)胞制成懸液，以靜脈輸注的方式在1 h內(nèi)完成輸注，總共進(jìn)行8次交替輸注)。若已完成6個周期的治療或有嚴(yán)重的不可耐受的不良反應(yīng)出現(xiàn)則停止治療，完成每個周期的治療時，檢測和評估患者的免疫功能及生命質(zhì)量，有效率評價每2個周期施行1次。
兩組患者外周血免疫細(xì)胞表型變化：在DC-CIK治療結(jié)束后的第7天及開始治療前通過熒光抗體法采用流式細(xì)胞儀對外周血T細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測：NK T細(xì)胞(CD3－/CD16＋56＋)、NK細(xì)胞(CD3－/CD16＋56＋)、免疫狀態(tài)(CD4＋/CD8＋)、T輔助細(xì)胞(CD3＋/CD4＋)以及總T淋巴細(xì)胞(CD3＋)。
依據(jù)目前已被廣泛應(yīng)用的評價實體瘤療效的標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)對療效進(jìn)行評價。病變穩(wěn)定(SD)：即基線病灶的最大徑之和增加≤20%或縮小<>
對患者治療后的不良反應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)觀察和記錄。依據(jù)WHO的標(biāo)準(zhǔn)將不良反應(yīng)分為0～Ⅳ度，同時對患者回輸DC-CIK細(xì)胞后出現(xiàn)的皮疹、發(fā)熱等不良反應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)觀察。
對DC-CIK治療前后兩組患者失眠、盜汗、局部疼痛、食欲不振、疲倦乏力等癥狀變化，即臨床癥狀的相關(guān)緩解情況進(jìn)行詳細(xì)觀察。
——1.3——
統(tǒng)計學(xué)方法
采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析。計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗或Fisher確切概率法進(jìn)行比較。檢驗水準(zhǔn)α＝0.05。
——2.1——
兩組患者的治療療效比較
觀察組患者3例CR，11例PR，4例SD，3例PD；對照組患者2例CR，7例PR，3例SD，10例PD；觀察組的RR(85.7%)高于對照組(63.6%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2＝4.949，P＝0.026)。
——2.2——
兩組患者治療不良反應(yīng)比較
兩組患者治療過程中出現(xiàn)的各種不良反應(yīng)發(fā)生率見表1，結(jié)果提示差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
——2.3——
兩組患者治療前后臨床癥狀比較
兩組患者治療前后臨床癥狀見表2。治療前兩組患者疲倦乏力、食欲不振、局部疼痛和失眠盜汗臨床癥狀差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而在治療后觀察組患者疲倦乏力、食欲不振和失眠盜汗的發(fā)生率均低于對照組(P<>
——2.4——
兩組患者治療前后的免疫細(xì)胞比較
治療前兩組患者的CD3＋、CD3＋/CD4＋、CD4＋/CD8＋、NK細(xì)胞、NK T細(xì)胞所占比例差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而治療后觀察組患者的CD3＋、CD3＋/CD4＋、CD4＋/CD8＋、NK細(xì)胞、NK T細(xì)胞所占比例均顯著高于對照組(P<>
乳腺癌對女性健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅，具有多途徑轉(zhuǎn)移以及易復(fù)發(fā)的特點，其發(fā)病率也在逐年增加，大概10%的乳腺癌患者在臨床確診時就已經(jīng)存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的情況。目前對MBC患者主要采用的是化療，但患者無法耐受不良反應(yīng)和化療耐藥以及極低的有效率限制了此類患者的治療，因此臨床上MBC患者治療的主要發(fā)展方向是綜合治療。
作為抗原呈遞的專職細(xì)胞，DC細(xì)胞的體內(nèi)功能最為高效，針對特異性的抗原，其成熟后能通過對腫瘤抗原的呈遞，激發(fā)宿主對其的免疫反應(yīng)，從而對腫瘤細(xì)胞免疫逃逸進(jìn)行抵制。CIK細(xì)胞是將CD3＋CD8＋、CD3＋D56＋T細(xì)胞作為主要效應(yīng)細(xì)胞的一種異質(zhì)細(xì)胞群，存在殺瘤譜廣、殺瘤活性高、增殖快等優(yōu)點。CIK和DC是在腫瘤免疫治療中占據(jù)重要地位的兩個部分，前者通過分泌細(xì)胞因子和發(fā)揮其自身細(xì)胞的毒性將腫瘤細(xì)胞殺傷，后者識別抗原并將獲得性免疫系統(tǒng)激活，兩者的聯(lián)合確保了和諧、高效的免疫體系，在臨床上有著較好的應(yīng)用前景。共同培養(yǎng)CIK和DC除了可以使組織相容性復(fù)合體(MHC)激活外，還能使CIK所具有的非MHC限制性殺傷細(xì)胞毒作用得到充分發(fā)揮，增強了其殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，將大量效應(yīng)細(xì)胞提供給腫瘤免疫治療，在治療腫瘤的臨床工作中發(fā)揮重要的價值。
本研究觀察組和對照組的有效率分別是85.7%和63.6%，觀察組的有效率明顯比對照組高，提示了DC-CIK免疫治療能使TA方案的有效率得到顯著提高，這與CIK細(xì)胞改變了乳腺癌對多柔比星的敏感性或DC-CIK細(xì)胞具有特異性殺傷乳腺癌細(xì)胞的能力等可能相關(guān)。在治療期間兩組患者產(chǎn)生的不良反應(yīng)基本一致，都有>75%患者脫發(fā)，考慮與多柔比星藥物的毒性作用可能相關(guān)，患者均可以耐受消化道反應(yīng)與骨髓抑制。觀察組患者在接受DC-CIK免疫治療的前后，機體自身細(xì)胞免疫表型出現(xiàn)了顯著的變化，NK T細(xì)胞(CD3－/CD16＋56＋)、NK細(xì)胞(CD3－/CD16＋56＋)、T輔助細(xì)胞(CD3＋/CD4＋)以及總T淋巴細(xì)胞(CD3＋)所占比例均顯著增加，提示患者自身免疫功能得到了顯著增強。機體自身免疫功能的衰退與腫瘤的發(fā)生存在密切關(guān)系，大部分腫瘤患者機體免疫力處于長時間低下的狀態(tài)，但DC-CIK細(xì)胞免疫治療能使患者機體的細(xì)胞免疫功能得到顯著提升，使機體抗腫瘤的免疫效應(yīng)得到顯著增強。尤其是對于已經(jīng)接受放化療治療、乳腺癌已發(fā)展至晚期的患者，DC-CIK細(xì)胞免疫治療給其深入治療提供了良好的環(huán)境。此外，通過DC-CIK細(xì)胞治療，患者的生命質(zhì)量也有了極大的改善，大概有>50%的患者在失眠盜汗、食欲不振、疲倦乏力等方面均得到了顯著的緩解，這與患者經(jīng)DC-CIK細(xì)胞治療后免疫功能得到了極大程度的提高有著直接聯(lián)系。
本研究通過單純TA方案與TA方案＋DC-CIK細(xì)胞治療MBC患者的對比，發(fā)現(xiàn)觀察組患者的治療有效率明顯比對照組高，且近期療效也更好，此外患者在DC-CIK免疫治療前后免疫功能有所增強，生命質(zhì)量獲得改善，無明顯的不良反應(yīng)，進(jìn)一步證實了該免疫治療的安全性和有效性，在MBC患者的治療中有著較好的推廣價值，且應(yīng)用前景也較為廣闊。
