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來源：生物世界 2022-06-04 08:59

自然殺傷（NK）細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，在控制惡性腫瘤發(fā)展方面發(fā)揮重要作用，近年來各種基于NK細(xì)胞治療腫瘤的療法日益受到大家的關(guān)注。然而，對于NK細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷，惡性實(shí)體瘤通常不如血液瘤敏感

自然殺傷（NK）細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，在控制惡性腫瘤發(fā)展方面發(fā)揮重要作用，近年來各種基于NK細(xì)胞治療腫瘤的療法日益受到大家的關(guān)注。然而，對于NK細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷，惡性實(shí)體瘤通常不如血液瘤敏感。部分原因是腫瘤微環(huán)境(TME)的復(fù)雜性和其免疫抑制的特性。

近日，加州大學(xué)圣地亞哥分校 Dan Kaufman 教授團(tuán)隊(duì)在 Nature Communications 期刊發(fā)表了題為：CHMP2A regulates tumor sensitivity to NK cell-mediated cytotoxicity的研究論文。該研究為提高NK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞療法提供了潛在的新靶點(diǎn)——CHMP2A。

 

該研究建立了一套名為“two cell type”的高通量全基因組篩選方法，來模擬腫瘤的分子調(diào)控，并篩選關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子。通過在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞（GSC）1517、387、 CW468和D456這四個(gè)GSC細(xì)胞系上慢病毒感染全基因組CRISPR-Cas9文庫，并與NK細(xì)胞共培24小時(shí)后，鑒定出25個(gè)可能幫助腫瘤獲得耐藥性的基因。

在對NK細(xì)胞敏感的GSC中，靶基因主要集中在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)吞噬體途徑、抗原提呈、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞凋亡、細(xì)胞定位和先天免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)中富集。在這25個(gè)基因中，CHMP2A作為排名第一的能提高GSC耐藥性的基因，引起了研究人員的注意。CHMP2A是ESCRT-III蛋白的一個(gè)亞單位，參與了細(xì)胞外囊泡（EVs）的分泌。EVs是細(xì)胞主動(dòng)分泌的具有膜結(jié)構(gòu)的微小囊泡的統(tǒng)稱，幾乎所有細(xì)胞都會分泌EVs。EVs作為一個(gè)重要組成部分參與了膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的形成、促進(jìn)遷移、入侵。

高通量全基因組篩選方法的工作流程及篩選結(jié)果

基于這一結(jié)果，為了驗(yàn)證TCT篩查結(jié)果，研究團(tuán)隊(duì)使用CRISPR-Cas9分別敲除了387和CW468和D456這三個(gè)GSC中的CHMP2A。三個(gè)GSC都顯示了CHMP2A基因敲除（KO）后對NK細(xì)胞介導(dǎo)殺傷的敏感性增加。同時(shí)，由于頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（HNSCC）是一種具有高度NK浸潤的癌腫，也在該細(xì)胞系中做了檢測，并獲得了和GSC相同的結(jié)果。同樣在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（HNSCC）小鼠模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，也證實(shí)了CHMP2A在促進(jìn)HNSCC Cal27細(xì)胞對NK細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷存在抵抗的作用。

CHMP2A KO提高了NK細(xì)胞對GSC和HNSCC細(xì)胞殺傷

為了研究CHMP2A調(diào)節(jié)NK細(xì)胞介導(dǎo)殺傷的潛在機(jī)制，研究團(tuán)隊(duì)通過RNA測序分析了CHMP2A表達(dá)缺失的GSC轉(zhuǎn)錄組。他們發(fā)現(xiàn)了CHMP2A-KO激活了NF-κB信號通路從而上調(diào)了CXCL10和CXCL12的表達(dá)，從而增強(qiáng)了NK細(xì)胞的遷移能力。研究人員發(fā)現(xiàn)CHMP2A通過促進(jìn)腫瘤分泌EVs從而引發(fā)NK細(xì)胞的死亡，CHMP2A KO或者使用抑制劑替吡法尼（Tip）（一種法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑）都可以減少EV的分泌，進(jìn)而增強(qiáng)NK細(xì)胞對腫瘤的殺傷效應(yīng)。

研究團(tuán)隊(duì)還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了EV膜上帶有MICA/B和TRAIL等配體蛋白，可以通過和NK細(xì)胞表面的NKG2D和TRAIL-R結(jié)合來誘導(dǎo)NK細(xì)胞凋亡，因此使用用MICA/BTRAIL的阻斷抗體治療可降低EVs對NK的抑制作用。